一、化学消毒灭菌:通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体或芽孢,消毒对象一般为物体表面、空气、污染物品等,消毒方式一般为擦洗、熏蒸、浸泡等;
二、物理消毒灭菌:包括压力蒸汽、紫外线、焚烧、HEPA过滤除菌等;具体的
1、热力灭菌法:分为干热灭菌和湿热灭菌两大类。在同一温度下,后者效力比前者大,这是因为湿热中细菌菌体蛋白较易凝固;湿热的穿透力比干热大;湿热的蒸汽有潜热存在。水由气态变为液态时释放出的潜热,可迅速提高被灭菌物体的温度。
(1)干热灭菌法:①焚烧,是一种彻底的灭菌方法,但仅适用于废弃物品或尸体等;②灼烧,直接用火焰灭菌,适用于微生物实验室的接种环、试管口等的灭菌;③干烤,鼓风干燥箱灭菌,一般加热到160℃-170℃经2小时,适用于高温下不变质、不蒸发的物品,如玻璃器皿、瓷器等。
(2)湿热灭菌法:①煮沸法,1个大气压下,煮沸的水温为100℃,一般细菌繁殖体煮沸5-10分钟即被杀死。细菌芽孢常需煮沸1-2小时,才被杀死。水中加入2%碳酸钠,可提高沸点达105℃,促进细菌芽孢的杀灭。②巴氏消毒法,用较低温度杀灭液体中的病原菌,同时又不影响消毒物品的营养成分及香味的消毒方法。加热61.1-62.8℃半小时即可,常用于牛奶和酒类等的消毒。③间歇灭菌法(郭霍氏蒸汽消毒),将待灭菌的物品100℃加热15-30分钟,杀死其中的细菌繁殖体,然后将物品置于37℃温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体,次日再通过流通蒸汽加热,如此连续3次,可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。针对有些培养基、牛奶、糖等在100℃以上有效成分易被破坏的产品进行灭菌。④高压蒸汽灭菌法,是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅--高压蒸汽灭菌器内进行的。通常采用纯饱和蒸汽压为103.4Kpa,温度达121℃,维持15-30分钟,可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。适用于各种耐热、体积大的培养基的灭菌,也适用于玻璃器皿、工作服、耐高温塑料用品等物品的灭菌。
2、辐照:利用辐射进行灭菌消毒,可以避免高温灭菌或化学药剂消毒的缺点,所以应用越来越广。
(1)紫外线:紫外线波长为200-300nm时具有杀菌作用,其中以260nm最强。紫外线杀菌机理主要是作用于细菌DNA,使同一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成嘧啶二聚体,因而改变DNA的分子构型,干扰细菌DNA的复制与转录,导致细菌的死亡或变异。紫外线穿透力差,故只适用于空气及不耐热物品的表面消毒。
(2)应用β射线作食品表面杀菌,γ射线用于食品内部杀菌。经辐射后的食品,因大量微生物被杀灭,再用冷冻保藏,可使保存期延长。
3、滤过除菌:采用机械方法,设计一种滤孔比细菌还小的筛子,做成各种过滤器。通过过滤,只让液体培养基从筛子中流下,而把各种微生物菌体留在筛子上面,从而达到除菌的目的。这种灭菌方法适用于一些对热不稳定的体积小的液体培养基的灭菌以及气体的灭菌。它的最大优点是不破坏培养基中各种物质的化学成分。滤过除菌主要用于一些不耐高温灭菌的血清、毒素、抗生素、药液、空气等除菌。但是比细菌还小的病毒仍然能留在液体培养基内,有时会给实验带来一定的麻烦。滤菌器的种类很多,目前常用的有蔡氏滤菌器、玻璃滤器、薄膜滤器。①高效过滤除菌,高效过滤除菌技术对空气中≤0.3um颗粒与微生物的阻留率能达到99.97%以上,主要用于生物安全柜与生物安全实验室的空气净化除菌。注意必须定期更换高效过滤器(HEPA),更换前应先用甲醛或过氧乙酸进行熏蒸消毒,更换时严格做好工作人员防护,换下的过滤装置装入密封袋内由具有资质的单位焚烧处理。