产品货号：ZC-RTPCR-460

产品名称：肺炎支原体核酸检测及分型试剂盒（荧光PCR法）

包装规格：25T/盒、50T/盒

预期用途：本试剂盒可用于口咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰液及细胞培养物中肺炎支原体检测以及1型、2型的基因分型。实验结果仅供科学研究使用，不作为临床诊断依据。

储存条件及有效期：

（1）运输：试剂盒必须在4℃条件下运输。

（2）保存：-20℃±5℃保存，应避免反复冻融。

（3）有效期：12个月，请在有效期内使用。

检验方法：

（1）样品制备（样本处理区） 细菌培养物样本：取1mL 增菌菌液或 1mL菌悬液（生理盐水或 1×TE）加入到 1.5mL 无菌离心管中，8000 rpm 离心 5 min后弃上清，保留沉淀，加入 DNA 提取液50μL，将沉淀悬浮后 100℃加热处理5min，12000 rpm 离心 2 min，取上清 进行 PCR 检测。 口咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰液等样本：建议使用商品化的 DNA 提取试剂盒进行提取，严格按照对应试剂 盒说明书进行操作。 

注：提取好的DNA应及时用于检测，否则应 - 20±5℃保存。 

（2）反应体系配制（试剂准备区） 从试剂盒中取出试剂进行室温解冻，颠倒混匀后瞬时离心。每个样品均应进行PCR扩增。若待检样品数量为n，则按 （n+1）个反应配制体系，建议增加阳性对照和阴性对照体系。将检测液按照每管20μL分装于PCR仪适用的PCR管中，盖 紧管盖并做好标记，转移至样本处理区进行加样操作。 

（3）加样（样本处理区） 将步骤1提取的DNA、阳性对照、阴性对照各取5μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 

（4）荧光PCR循环条件设置（核酸扩增区） 

检测设置：反应体系设置为 25μL；“Reporter Dye”设置为FAM（普通TaqMAN探针）、VIC（MGB探针）， “Quencher Dye”均为MGB。

（5）结果分析判定

5.1 结果分析条件设定 设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线 至高于阴性对照)，重新分析结果。 

5.2 对照标准 阴性对照：无明显扩增曲线或无Ct值显示； 阳性对照：扩增曲线有明显指数生长期，且Ct值<35； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 

5.3 结果判断 阳性：检测通道Ct值<35.0，且有明显的扩增曲线。 可疑：检测通道35.0≤Ct值<40.0，且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现Ct值<40.0且有典型扩增曲线者为阳性，否则为阴性。阴性：检测通道无Ct值或无明显的扩增曲线。

检验结果：