1、分离纯化

将每个15mL离心管内溶液混匀，然后用巴斯德玻璃吸管从溶液底部缓慢加入5mlPercoll-蔗糖溶液，加入过程中避免搅混两种溶液。在1050g、20℃条件下离心10min(勿用制动器，减速度为0)。离心结束后，用塑料吸管取中间层(从中间层上部吸取)富含孢囊的混合液于新的15ml离心管中。同一个样品的孢囊混合液可放置于同一离心管中。向离心后的沉淀物中添加2.5mL的PBST，混匀。再次从溶液底部缓慢加入5mlPereoll-蔗糖溶液按照上述步骤进行二次分离纯化，纯化后取中间层混合液，与上述混合液合并。

2、染色

用免疫组化笔在醋酸纤维滤膜的外周画圆圈，再用镊子将滤膜平移至纯水液面上使其反面湿润。操作时滤膜不要浸入液面。

将上述醋酸纤维滤膜用平头镊子平移至真空抽滤器上，用吸管吸取上述混合液逐滴加到圆圈内进行抽滤。滴加时避免将混合液溅到圆圈外。抽滤过程中，滤膜上要保持有一薄层液面，以防止滤膜干燥后破损。抽滤液体后，用3mlPBS淋洗15ml离心管，淋洗液用上述方法抽滤。抽滤液体后，在滤膜圆圈内滴加0.50mLBSA溶液，保持2min，若圆圈内仍有明显液体残留则继续抽滤。

用镊子将滤膜平移至载玻片上，在滤膜圆圈内滴加一滴免疫荧光试剂。将载玻片置于潮湿暗环境中，在室温条件下避光静置30min。再向滤膜圆圈内滴加0.10mLDAPI染色溶液，室温条件下避光静置10 min。

用镊子将滤膜平移至真空抽滤器上进行抽滤，在滤膜圆圈内滴加4mLPBS进行淋洗。抽滤液体后，依次向圆圈内滴加各3ml的脱水剂30、脱水剂70和脱水剂90进行抽滤。

于新的载玻片上滴加1滴DABCO-甘油，用镊子将上述滤膜平行移到有DABCO-甘油的载玻片上。再在滤膜圆圈内滴加一滴DABCO-甘油，盖上盖玻片(不要有气泡)并进行固定。于0℃~4℃冷藏避光保存，保存期为7d。

3、镜检

使用泰林基于人工智能技术的两虫自动识别系统，实现人工智能图像处理自动识别代替人工肉眼识别；建立贾第鞭毛虫孢囊和隐孢子虫卵囊形态图像数据库，综合神经网络识别算法和多维度判识；全自动玻片两虫区域识别对焦观察，解放人工观察双手双眼，可自动完成区域扫描、观察、成像；彻底解决传统分析方法的费时、效率低、依赖经验等难题，降低两虫识别门槛，提高检测效率。