百日咳（pertussis,whooping cough）是由百日咳鲍特菌（Bordetella pertussis）感染引起的急性呼吸道传染病，是《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病。中华人民共和国国家卫生健康委员会发布的《百日咳防控方案（2024年版）》总体要求开展多渠道监测预警，加强疫情分析与风险研判，及时发现、规范治疗病例，有效处置聚集性疫情，坚决遏制百日咳疫情扩散蔓延势头，最大限度降低重症、死亡风险。

百日咳鲍特菌最适生长的温度为35～37℃，对生长营养条件需求较高，体外较难培养，对外界理化因素抵抗力较弱，在体外存活时间短。因此，针对百日咳鲍特菌的采样和培养研发了百日咳鲍特菌增菌培养检测试剂。其使用指南如下：

①样本采集

根据采样要求，使用鼻/咽拭子采集样本；将采样拭子放到百日咳鲍特菌样本采集液中，折断采样拭子杆高出部分或按断点折断拭子，拧紧盖子，标记样本信息，冷藏送至实验室处理。

若标本预计48h内进行检测，可于2~8℃冷藏保存；若标本计划1个月内完成检测，可于-20℃低温冻存；若标本需长期保存，可-70℃以下超低温冻存。低温保存期间标本不可冻融。

②样本处理：

将样本采集液中的鼻/咽拭子充分挤压50~80次或者涡旋震荡30s，让标本中的细菌均匀分布于采集液。冻存标本需解冻溶化后按上述方法混匀使用。处理后的标本可进行PCR鉴定，也可以接种于选择培养基或增菌培养基进行分离培养。

③样本增菌：

1）增菌液配制：百日咳鲍特菌增菌液须现用现配，实验前取所需数量的基础增菌液、添加剂A、添加剂B，无菌操作放入生物安全柜，溶化后将添加剂A、B颠倒混匀瞬时离心，分别取添加剂A 20μL、添加剂B 200μL加入到1.8 mL的基础增菌液中混匀备用。

注：①实验过程严格执行无菌操作；②百日咳鲍特菌增菌液需要现用现配；③添加剂反复冻融会降低分离培养效果，建议第一次使用后适当分装冻存。

2）增菌培养：取200μL混匀后的采集液，加入到2 mL现配的百日咳鲍特菌增菌液中，36±1˚C静置培养48 h～72 h。

④平板培养：

平板培养：增菌后充分混匀培养液，取50-100μL的增菌液划线或者直接涂抹于木炭选择性琼脂平板上，37±1˚C培养3～7天，挑取疑似菌落进行镜检、生化试验、荧光PCR或者质谱等方法鉴定。