（四）硫化氢(H2S)产生试验
1. 原理:
不同种型布鲁氏菌在新陈代谢过程中所需要的各种氨基酸有所不同,有些种型布鲁氏菌可将培养基中含硫的氨基酸分解,产生硫化氢、氨和脂肪酸等,硫化氢可与醋酸铅发生反应形成黑色的含铅硫化物,据此可以区别某些种型的布鲁氏菌。
2. 试验材料、试剂制备:
(1) 布氏琼脂斜面培养基配制
布氏琼脂培养基：43g
蒸馏水：1000m1
煮沸混匀,分装玻璃试管,高压灭菌后斜放凝固制成布氏琼脂斜面培养基保存备用。
(2) 醋酸铅滤纸条制备：
将普通滤纸剪成长7~8cm长,0.8~1cm宽小条,经灭菌后浸泡在 10%醋酸铅水溶液中 24小时,取出放灭菌的方盘中,温箱烤干。
(3) 操作方法：
将待检菌 48 小时培养物用灭菌生理盐水制成 10 亿菌体 /ml的菌悬液,用直径2mm的接种环勾取一环菌悬液(或10μL菌悬液)接种在pH6.8的琼脂斜面上,将醋酸铅滤纸条夹于斜面与管壁之间,使滤纸条和斜面保持平行,以不接触斜面为宜。滤纸条留在管外约1~2cm,置 37℃温箱培养,经2、4 、6天各观察一次结果,以毫米计算滤纸条变黑长度。每观察一次更换-个滤纸条,3 次变黑长度总和为最后结果,不变黑为阴性。
(4) 结果判定：
猪种1型布鲁氏菌产生H2S量最多,持续时间可达10天滤纸条变黑部分可达19~20mm以上。
牛种布鲁氏菌1~4和9型布鲁氏菌、沙林鼠种布鲁氏菌均能产生中等量的H2S,滤纸条变黑部分5~8mm。
牛种布鲁氏菌6和7型的某些菌株也能产生少量的H2S,其余种型布鲁氏菌不产生H2S。
但我国某些地方分离的猪种3型布鲁氏菌和羊种1型布鲁氏菌可产生微量H2S,使滤纸条下端呈现黑褐色的一个小边,类似灰线条样,有的滤纸条变黑在 0.5~1mm 之间。