（一）布鲁氏菌菌种保存

1.配制脑心浸液甘油培养基,分装于密封的螺口冷冻管或冷冻瓶内；

2.将鉴定好的布鲁氏菌接种于布氏琼脂斜面,37℃培养24~48小时；

3.在新鲜培养的培养管中加人脑心浸液甘油培养基,配制成约2~3×10¹⁰个细菌/ml的悬液。

4.每管菌悬液可分装多管,每管约为0.25~0.5ml,密封后置于冷冻盒中，贮存于-80℃冰箱,长期保存。

5.混悬菌液、分装菌液的过程中容易造成菌液溢出和气溶胶。在操作时小心谨慎,避免管装过满,不能超过容积的1/2。在抽取菌液时,动作要轻柔。

(二)液体保存的菌种复苏

取出冷冻保存的菌种管,在生物安全柜内打开菌种保存管,尽快用接种环刮取冰屑接种于布氏琼脂斜面培养基上。放置于37℃培养箱中,培养期间观察菌株生长情况(牛种菌和绵羊附睾种菌需 5%~10% 的 CO₂)。