提取兔补体的方法主要涉及使用ELISA试剂盒进行检测。
样本处理及要求:
对于血清,需要在室温下让血液自然凝固10-20分钟,然后离心20分钟左右(转速为2000-3000转/分)。收集上清液并保存,如果在保存过程中出现沉淀,应再次离心。
对于血浆,应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合后离心20分钟左右(2000-3000转/分)。同样地,收集上清液并保存,如有沉淀形成,应再次离心。
对于尿液,使用无菌管收集后离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清液。
对于细胞培养上清,如果是检测分泌性成分,使用无菌管收集后离心。如果是检测细胞内成分,则用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,通过反复冻融使细胞破坏并释放出细胞内成分,然后离心收集上清。
对于组织标本,切割后称重,加入一定量的PBS(PH7.4),用液氮迅速冷冻保存。标本融化后保持在2-8℃的温度,加入PBS(PH7.4),用手工或匀浆器充分匀浆。
ELISA检测原理:
ELISA试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。在预包被抗兔补体蛋白的微孔酶标板中加入待测样本和标准品,再加入HRP标记的抗体,经过温育和洗涤后,形成固相抗体-抗原-HRP标记抗体的夹心复合物。加入显色底物后,在酶标仪450nm波长下测定吸光度(OD值),吸光度与待测样品中兔补体蛋白的浓度正相关。
通过上述步骤,可以有效地提取和检测兔补体蛋白。需要注意的是,这些试剂盒仅供科研使用,不得用于临床诊断,并且应在试剂盒标示的有效期内使用。
欢迎关注我们网站了解更多关于兔补体的知识。