产品名称：汉坦病毒核酸检测试剂盒(探针法)
产品规格：25T/盒、50T/盒
产品货号：ZC-RTPCR-322

【预期用途】

本试剂盒用于血清样本中HV RNA的定性检测。实验结果仅供科学研究使用，不作为临床诊断依据。

【检验原理】

本试剂盒采用实时荧光PCR技术，针对HV特异基因设计特异性引物和探针，通过收集PCR扩增产生的荧光信号，确定待测目标是否含汉坦病毒。

【使用方法】

1. 样品处理（样本处理区）

1.1 RNA提取

建议使用商品化的RNA提取试剂盒进行提取，严格按照对应试剂盒说明书进行操作。

注：1.提取好的RNA应及时用于检测，否则应 - 70℃以下保存。

2.本品中的阴性对照需参与核酸提取；阳性对照不需参与核酸提取。

2. 试剂配制（试剂准备区）

从试剂盒中取出试剂进行室温解冻，颠倒混匀后瞬时离心。每个样品均应进行反应体系的PCR扩增。若待检样品数量为n，则按（n+1）个反应配制体系，建议增加阳性对照和阴性对照体系。将反应体系试剂加入适当体积的无菌离心管中，振荡混匀后瞬时离心，按20μL/管分装至八联PCR反应管，盖紧管盖并做好标记，转移至样本处理区进行加样操作。反应体系配制如下：

3. 加样（样本处理区）

将步骤1提取的RNA、阳性对照、阴性对照各取10μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。

4. PCR扩增（核酸扩增区）

4.1 将待检测反应管置于荧光定量PCR仪反应槽内；

4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为30μL；

荧光通道选择：Reporter Dye1：FAM，Quencher Dye1：NONE；Passive Reference：NONE。

4.3推荐循环参数设置：

注：程序1适用于LightCycler480、ABI Prism 7500、ABIQ5、ABIQ7、STRATAGENE Mx3000p、BIO-RAD CFX96、雅睿 MA-6000 荧光 PCR 扩增仪；程序2适用于宏石 SLAN-96S、宏石 SLAN-96P、天隆 Gentier 96、ABIQ5、ABIQ7、BIO-RAD CFX96 荧光 PCR 扩增仪。

5. 结果分析判定

5.1结果分析条件设定

设置Baseline和Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节Baseline的start值(一般可在3~15范围内调节)、stop值(一般可在5~20范围内调节)，以及Threshold的Value值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。

5.2对照标准

阴性对照：无明显扩增曲线，且无Ct值或Ct 值为0。

阳性对照：扩增曲线有明显指数增长，且Ct 值<33。

以上条件应同时满足，否则实验视为无效。

5.3结果判断

阳性：检测通道 Ct 值≤38，有明显指数增长。

可疑：检测通道 Ct 值在38～42 范围。此时应对样本进行重复检测，如重复实验结果 Ct 值≤38，有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

阴性：检测通道 Ct 值为0 或无 Ct 值。

【检验结果的解释】

【注意事项】

本试剂盒仅供临床参考和科学研究使用