产品名称：空肠弯曲菌十种毒力基因 多重核酸检测试剂盒(探针法)
产品规格：25T/盒 、50T/盒
产品货号：ZC-CAMPY-030

【预期用途】

本试剂盒可用于从核苷酸序列鉴定空肠弯曲菌的10个毒力基因（包括cdtA,cdtB,cdtC, hcp, virB11, ciaB, ggt, cgtA, cgtB, cgtC）。实验结果作为空肠弯曲菌毒力基因的快速筛查，仅为基础研究提供参考，不作为临床诊断依据。

【检验原理】

本试剂盒采用多重荧光PCR技术，对同一样本采用A、B、C、D四个多重荧光PCR反应检测空肠弯曲菌的10个毒力基因。其中A管用于鉴别空肠弯曲菌的三个毒力基因（cdtA,cdtB,cdtC）；B管用于鉴别空肠弯曲菌的2个毒力基因（hcp, virB11）；C管用于鉴别空肠弯曲菌的2个毒力基因（ciaB, ggt）；D管用于鉴别空肠弯曲菌的3个毒力基因（cgtA, cgtB, cstII）。

【样本要求】

培养基上的空肠弯曲菌单菌落或者保存的空肠弯曲菌菌种的扩增培养物均可使用本试剂盒进行检测。

【操作步骤】

1. 样品制备

按照本试剂盒配套的细菌DNA提取试剂或者应用其它商用试剂盒进行DAN提取。提取的DNA可直接用于检测；若样本提取后不立即检测，也可存于-20℃或-70℃备用。应避免反复冻融。

2. 反应体系配制

（1）体系配制：从试剂盒中取出试剂室温融化，待试剂完全解冻，颠倒混匀后瞬时离心。每个样品均应进行A、B、C、D四管的PCR扩增。若待检样品数量为n，则按4×（n+1）个反应配制体系，包括A管的n+1个反应、B管的n+1个反应、C管的n+1个反应和D管的n+1个反应（建议增加阳性对照和阴性对照体系）。每种反应体系配制如下表。

（2）体系分装：将上述反应液混匀后瞬时离心，按照每管19 μL分装于PCR仪适用的PCR管中。

（3）加样：每个样品需做A/B/C/D四管检测。分别取步骤1中提取的核酸样品1 μL，加入A管、B管、C管和D管体系对应的PCR反应管中，总反应体积为20μL。阴阳性对照分别在A管、B管、C管和D管体系中加入相应模板1μL。

3. 荧光PCR循环条件设置

检测设置：“Reporter Dye”设置为FAM、VIC（HEX）和CY5，“Quencher Dye”均为None。对于ABI系列仪器，注意将“Passive Reference”设置为None。

4. 结果分析与判定

（1）调整阈值：阈值设定原则为以刚好超过正常阴性对照的荧光信号最高点为阈值线，或根据仪器噪音情况进行调整。

（2）质量控制：阴性对照无扩增曲线，且阳性对照有S型扩增曲线，实验成立。否则视实验结果无效。

（3）结果判断与解释：a）若样品有S型扩增曲线且Ct值<35，根据检测基因所对应的荧光通道按照下表进行判定；b）若有S型扩增曲线，且35≤Ct值<40，判定为不确定样品，需重新提取核酸后进行检测；若复检的样品有S型扩增，且Ct值小于40，根据检测基因所对应的荧光通道按照下表进行判定，否则判定为阴性；c)若无明显S型扩增曲线，但报告有Ct值，为非特异性扩增，可能是探针降解所释放的非特异荧光信号，判定为阴性。

不同毒力基因阳性的判定标准