军团菌初筛包括平板生长试验、革兰染色镜检,生化试验。
(1)平板生长试验
将可疑菌株接种到BCYE和BCYE-CYS(或血平板)两种培养基上。观察菌株生长情况。(军团菌不在BCYE-CYS或血平板上生长)。在BCYE培养基上生长,可能为军团菌。而在BCYE-CYS(或血平板)两种培养基均生长者不是军团菌。
(2)革兰染色镜检
军团菌是革兰染色阴性,浅红色的短杆菌,直径0.3μm~0.5μm,长约1.2μm~5μm或更长,菌体一端有鞭毛,长时间培养后鞭毛可能变成长丝状。
(3)生化试验
①触酶试验
挑取一环(10µL)BCYE琼脂上对数生长期的细菌,于洁净玻片上,加1滴新鲜配制的3%的过氧化氢溶液覆盖细菌。如果30s内冒出气泡,则表示此细菌含有触酶,属于阳性反应。超过30s为阴性。
②马尿酸水解试验
将待鉴定菌株,于1%马尿酸钠溶液中,制成2.0麦氏浓度(108CFU/mL)菌悬液,于36℃±1℃,2.5%~5%CO2培养箱培养2h后,沿管壁加入3.5%水合印三酮试剂,观察颜色变化。如果15min内,溶液出现蓝紫色至深紫色变化,为阳性反应。溶液无颜色变化或15min后出现颜色变化为阴性。
军团菌生化特性相对来说不明显,一般触酶(+),水解马尿酸(+)。
综上所述,在BCYE培养基上生长,而在BCYE-CYS(或血平板)上不生长者,如果镜下形态为浅红色的短杆状或丝状,触酶(+),水解马尿酸(+),可考虑该菌为高度可疑军团菌。
军团菌的生化特性相对不明显,生化试验鉴定结果仅作参考。除了上述传统方法,也可以通过微生物质谱、特异基因PCR检测、16sRNA基因测序的方法进行鉴定。