军团菌（Legionella）是一类革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然水体中，尤其在温暖、潮湿的环境中繁殖迅速。它们喜欢藏身于空调系统、冷却塔、热水器等人工水系统中，通过气溶胶传播进入人体肺部，引发感染，“军团病”就是一种由军团菌引起的严重肺炎，在免疫力低下的人群中具有较高的致死率。虽然军团菌在自然界中无处不在，但要成功分离和培养它们却并非易事。军团菌对营养要求苛刻，且生长缓慢，因此需要特殊的培养基和培养条件。

1、标本采集

军团菌的临床标本包括痰、支气管肺泡灌洗液、胸腔穿刺液、胸水等。标本采集后应立即接种，不能接种的标本放于4℃冰箱保存，最好于24h内进行接种，为抑制其他细菌生长，应当采用选择性培养基。

2、分离培养

军团菌在常规的呼吸道病原菌初代分离培养基上不能够生长，在BCYE培养基上生长。但是，某些种的军团菌在BCYE培养基上生长微弱。军团菌最适宜的生长条件是35～37℃，2.5%～5%CO2。军团菌初代培养需要铁离子和半胱氨酸，因此，在不含 L-半胱氨酸的BCYE培养基（BCYE-cys）上不能够生长。为了减少杂菌的干扰，初代培养时需要使用选择性的培养基（如：MWY、GVPC）以抑制杂菌生长。

操作如下：

（1）将新鲜采集的标本（痰、支气管肺泡灌洗液、胸腔穿刺液、胸水等）取100μL划线接种到GVPC、MWY琼脂上，35～37℃，2.5%～5%CO2培养；

（2）每天观察细菌生长情况，最少孵育15d时间。

注：在培养箱内放置一个盛水托盘，以保证培养箱内空气的湿度；CO2环境有利于军团菌生长。