布鲁氏菌试管凝集试验：

1897年莱特氏等（Wright）与其同事发现患该病的病人血清与马尔他细菌的培养物产生了凝集现象，遂称之为莱特氏凝集反应，成了迄今常用的血清学诊断方法之一。

设备及试剂：试管凝集抗原、被检血清、0.5%的石碳酸生理盐水、吸管、试管、试管架、孵箱

操作步骤：

被检血清的稀释：一般情况下，每份血清用5支小试管，第一管加入2.3ml石碳酸生理盐水，第二管不加，第三、四、五管各加入0.5ml，用1ml吸管吸取被检血清0.2ml，加入第一管中，混匀。混匀后，以该吸管吸取第一管中血清加入第二和第三管各0.5ml，以该吸管将第三管混匀，并吸取0.5ml加入第四管，依次稀释到第五管，混匀后，从第五管吸出0.5ml弃去，如此稀释后，从第二管起血清稀释度分别为1：12.5、1：25、1：50、1：100.

加入抗原：先以0.5%石碳酸生理盐水将抗原原液做适当稀释，（一般是作1：10稀释），稀释后的抗原加入各稀释的血清管（第一管不加，作为血清对照），每管0.5ml，混匀。加入抗原后，第二管至第五管每管总量为1ml，从第二管起血清稀释度分别为1：25、1：50、1：100、1：200，从第一管再吸出0.5ml，剩1ml。

对照管的操作：

抗原对照：（适当稀释的抗原加石碳酸盐水）

被检血清对照

阴性对照（阴性血清稀释后加抗原）

阳性对照（阳性血清稀释到原有滴度加抗原）

然后将试验管和对照管充分混匀后，放于37℃温箱中20-22小时后取出，在室温下放置2个小时，以比浊管为标准判定结果。

结果判定：

判定比浊管的制备：每次试验须配置比浊管作为判定的标准依据。

配制方法是：取本次试验用的抗原稀释液（一般1：10）5-10ml，加入等量的0.5%石碳酸生理盐水作倍比稀释，按下表配制比浊管。

试管凝集反应标准比浊管配制：

结果记录：

根据各管中上层液体的清亮程度记录结果，特别是50%清亮度（++）对判定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。

血清对照为清亮透明无沉淀，抗原对照为均匀浑浊在两种对照管都成立的情况下，才可判定试验管，否则应重做。对沉淀需要经验判定。

“++++”：完全凝集，上清液100%清亮；

“+++”：几乎完全凝集，上清液75%清亮；

“++”：显著凝集，上清液50%清亮；

“+”：微量凝集，液体25%清亮；

“-”：无凝集，液体不清亮。

确定每份血清滴度是以出现“++”及以上的凝集现象的最高血清稀释度。

诊断标准：

没有进行过菌苗接种的人、畜血清试验的标准是：人、牛、马、鹿、骆驼等大家畜血清为1：100（++）及以上者为阳性，1：50（++）为可疑；

猪、羊（绵羊、山羊）、犬等小家畜血清在1：50（++）及以上者为阳性，1：25（++）为可疑；

对可疑反应的人和动物应在10-25天内重复检查，以便进一步确定诊断。

影响试验结果的因素及注意事项：

1、受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放血清处温度不能超过10℃，采血后应于3-4日内进行检查，因放置时间过长可能会导致血清效价降低。

2、遵守操作规程：作用的器材要清洁、干燥，试剂的加量一定要正确，放入温箱的温度和时间都要按要求，否则都影响结果，每份血清和抗原均要有对照。

3、高渗盐水作凝集反应，一般浓度在10-12%，一般切记人血清不能用高渗盐水。

4、作凝集反应时，有个别血清会出现前带现象，即稀释度低的血清管内（或血清量多的格）不发生凝集，而稀释度高的管内（或血清量少的格）出现凝集，这叫做前带现象，如果某血清在平板凝集反应中出现了前带现象，那么做试管反应时应多做几个管，多采用几个稀释度。

5、氯化钠的含量增高对血清反应有明显的影响，盐的浓度越高，反应的敏感性提高，因此在兽医界为了客服凝集反应中的阻抑抗体的干扰，对羊血清采用高渗盐水作凝集反应，一般浓度在10-12%，切记一般人血清不能用高渗盐水。

6、前带现象产生的原因：①胶体粒子学说：血清稀释度低所含的胶体粒子多，它影响抗原抗体的结合，而稀释度高的则含胶体粒子少，所以出现凝集。②不完全抗体学说：血清中因存在不完全抗体竞争抗原，所以在低稀释度的管中不凝集。③抗原抗体比例失调，也就是抗体过剩或血清内含有过多防腐剂，严重污染可造成前带现象的产生，封闭抗原的干扰。

评价：

该方法特异性较好，敏感性也高，因此适用于检疫和临床诊断。

由于该试验有时出现前带现象和封闭现象，所以有时也出现假阴性结果，必要时和其他方法联合应用。

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