开裂原因:
1、琼脂
①琼脂本身的质量:不同的琼脂在保水性和弹性方面有差异,弹性好的琼脂在失水后变薄或缩小,弹性差的琼脂出现开裂。
②琼脂使用量:琼脂过量或琼脂粉浓度高,导致平板较硬,例如一些低营养培养基,其碳源、氮源基本为无机盐,培养基成分中大部分为琼脂,这类培养基培养时间过长的话,易造成水分流失而干裂;培养基灭菌之后最好不要放置时间过长或者二次溶解,会减少水份。
③平板生产过程:培养基倒平板时的温度一般在49-50℃,一瓶培养基400mL,倒至底部时培养基已经开始凝固,因此需要快速倾倒,倒至底部时轻轻摇匀;培养基冷却凝固时,开风吹的时间过长,一般冷却凝固时间为15-20分钟。
2、平板
①平皿本身的质量:平皿不平,盖不严,空隙过大,使平板的透气量过大,能使水分大量挥发,但平皿的密封性过高有可能影响需氧微生物的生长,因此需要根据实际情况选择透气性合适的平皿。
②倾注的培养基少,平板较薄,易开裂。
3、培养箱
生化培养箱、非隔水式的培养箱、立式培养箱是不停加热的,用风使内部的温度均匀,气流循环带走水分,导致培养室干燥,风速太大,容易将平板吹干、吹裂,另外,生化培养箱在制冷时会蒸发水分,为保证温度波动小,会频繁加热制冷,可以试着调节培养箱压缩机的启动温度。
4、效期
新制备的平板一般不容易出现干裂问题,而长时间保存的或储存温度过高的平板更容易出现干裂现象。
针对上述原因,分别对应措施:
1、琼脂
①比较不同厂家的琼脂质量,选择最优厂家。
②培养基配置多加点水,适量降低琼脂粉浓度,配置过程避免溶解时间太长,水分挥发过多。
③寻找合适生产线,不用人工倒平板,恒温匀速流出,干燥过程避免风吹。
2、平板
①检查平皿的质量,选择透气性合适的平皿。
②平板倒得稍厚一点,按照GB4789要求,倾注融化的培养基到平皿中,使之在平皿中形成厚度至少为3 mm(直径90 mm的平皿,通常要加入18 mL~20 mL琼脂培养基)。如果平板需储存,或者培养时间超过48 h或培养温度高于40℃,则需要倾注更多的培养基。
3、培养箱
①培养箱出厂设置的风速一般是100%的,有些如进口培养箱是可以调风速的,一般调60-70%就可以。
②培养基摆放远离风扇,也不要放到培养箱的最底部,一定要放在架子上,因为底部的温度会比较高,蒸发水份快。
③ISO提到用塑料袋或者保鲜袋包着培养基,但是要留着开口通风换气,开口方向背对出风口;也可以在加样后,贴上封口膜,再放入培养箱试试,也许会影响到耗氧,是否影响菌生长,可以做个对照实验试试看;拿报纸把平皿挡起来。
④培养箱底放无菌水,使用开口大点的容器如托盘、平皿等,及时添水,避免干涸,保持室内湿度;
⑤用细菌培养箱和霉菌培养箱或没有鼓风系统的小型培养箱,烘箱自带干燥功能,培养基肯定会干,资金足够尽量买恒温恒湿培养箱。
4、效期
如接单生产,避免长时间储存。冷库存放。