（  兔抗脑膜炎球菌诊断血清试剂(A、B、C、W、X、Y、E、Z、L、H、I、K、多价Ⅰ、多价Ⅱ，多价Ⅲ、多价Ⅳ群)     2mL*16种 / 盒 ）

一、检测方法

1. 本产品在使用前，由冰箱拿出，平衡到室温后使用。

2. 样品分离培养物，经鉴定确定为脑膜炎奈瑟菌后，再进行血清分群检测，如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3. 待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，37℃，5% CO₂，培养 18-24 小时。

4. 用酒精擦拭载玻片。用蜡笔或防水笔在载玻片上划格分区。

5. 在玻片每格的下半部分，用移液器滴加 5%的福尔马林溶液 10μL（基于生物安全目的），用无菌或一次性 10μL 接种环挑取 BAP 平板上过夜培养的新鲜菌落，在玻片上将细菌与 5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

6. 在玻片的上方加 10μL 血清群特异的抗血清，同时在阴性对照侧加 PBS 或者生理盐水。

7. 也可滴加 20μL 抗血清在玻片上，挑取新鲜菌落直接与抗血清进行混匀，观察凝集反应。（如采用非灭活菌进行凝集，操作严格遵守生物安全操作规范，在 BSL-2 级生物安全柜内进行操作）。

8. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合 5 分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清群的血清会相互混合污染。

9. 在灯光下，黑暗背景条件下 5 分钟内观察结果。如果超过 5 分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

10. 建议待检细菌先分别与多价 I、多价 II、多价Ⅲ和多价Ⅳ抗血清进行凝集反应，如与多价 I 出现凝集反应阳性，再分别再与 A、B、C 三个群特异抗血清进行凝集反应；如与多价 II 出现凝集反应阳性，再分别再与 W、X、Y 三个群特异抗血清进行凝集反应；如与多价Ⅲ出现凝集反应阳性，再分别再与 E、Z、L 三个群特异抗血清进行凝集反应；如与多价Ⅳ出现凝集反应阳性，再分别再与H、I、K 三个群特异抗血清进行凝集反应。

二、检验结果的解释

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

                  ＋＋＋＋       ＋＋＋        ＋＋         ＋          ±           －

4+   所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+   75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+   50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+   25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/-   少于 25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0     没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1.  5 分钟内，出现 3+或 4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。对于 B 群脑膜炎奈瑟菌来说，如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。

2.  阴性反应是+/-、1+凝集程度。

3.  当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清群。

4.  如果不能确定血清群，菌株记为不可分群脑膜炎奈瑟菌（NG）。

5.  关于不可分群脑膜炎奈瑟菌（NG）菌株:

1)  在生理盐水中凝集，无论与任何一种抗血清发生强凝集，记为 NG。

2)  在生理盐水中不凝集，但和多种抗血清发生凝集，记为 NG。

3)  在生理盐水中不凝集，也不和任何一种抗血清发生凝集，记为 NG。