(    兔抗流感嗜血杆菌诊断血清试剂 ( a、b、c、d、e、f 型 )      2mL*6 种 / 盒    )

一、检测方法

1. 本产品在使用前，由冰箱拿出，平衡到室温后使用。

2. 样品分离培养物，经鉴定确定为流感嗜血杆菌后，再进行血清分型检测，如果未能确定为流感嗜血杆菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3. 待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，37℃，5% CO²，培养 18-24 小时。

4. 用酒精擦拭载玻片。用蜡笔或防水笔在载玻片上划格分区。

5. 在玻片每格的下半部分，用移液器滴加 5%的福尔马林溶液 10µL（基于生物安全目的），用无菌或一次性 10µL 接种环挑取 BAP 平板上过夜培养的新鲜菌落，在玻片上将细菌与 5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

6. 在玻片的上方加 10µL 血清群型特异的抗血清，同时在阴性对照侧加 PBS 或者生理盐水。

7. 也可滴加 20µL 抗血清在玻片上，挑取新鲜菌落直接与抗血清进行混匀，观察凝集反应。（如采用非灭活菌进行凝集，操作严格遵守生物安全操作规范，在 BSL-2 级生物安全柜内进行操作）。

8. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合 5 分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清型的血清会相互混合污染。

9. 在灯光下，黑暗背景条件下观察结果。5 分钟内呈 2+及以上凝集现象为阳性，5 分钟内呈现 2+以下凝集现象为阴性。如果过了 5 分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

二、检验结果的解释

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

＋＋＋＋      ＋＋＋          ＋＋          ＋           ±         －

4+ 所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+ 75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+ 50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+ 25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/- 少于 25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0 没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1.  5 分钟内，出现 3+或 4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。

2.  阴性反应是+/-、1+凝集程度。

3.  当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。

4.  当一个菌株可以同时和一个以上抗血清反应时，结果记为不可分型流感嗜血杆菌（NG）。