一、测定液体培养基中活的和已丧失生活能力的细菌总数
(1)显微镜直接计数法
采用细菌计数器或血细胞计数板在光学显微镜下直接观察并进行计数;
(2)涂片计数法
将已知体积(0.01mL)的待测样品,均匀地涂布在载玻片的已知面积内(1cm),经固定染色后,在显微镜下选择若干个视野计算细菌的数目。
(3)比浊法根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。
二、活菌数量的测定
(1)平板菌落计数法
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后,理论上可以认为充分稀释后其中的微生物可以分散为单个细胞,取一定量的稀释液与冷却至合适温度的培养基进行混合浇注平板或涂布到已凝固平板上,经过保温培养后,由每个单细胞生长繁殖形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
(2)最大概率数(MPN)
将待测样品在定量培养液中进行一系列稀释培养。在一定稀释度以前的培养液中出现细菌生长,而在这个稀释度以后的培养液中不出现细菌生长。将最后3级有菌生长的稀释度称为临界级数,以 3~5次重复的3个临界级数求得最大概率数(MPN),可以计算出样品单位体积中细菌的近似值。
三、薄膜过滤计数法
测定水与空气中的活菌数量时,由于含菌浓度低,则可先将待测样品(一定体积的水或空气)通过微孔薄膜(如硝化纤维薄膜)过滤浓缩,然后把滤膜放在适当的固体培养基上培养,长出菌落后即可计数。