1、原理:
首先在水样中加入氯化钙溶液和碳酸氢钠溶液形成碳酸钙沉淀浓缩样品,将浓缩后的样品通过密度梯度离心进行分离纯化,然后将纯化后的样品经免疫荧光染色,通过荧光显微镜对贾第鞭毛虫孢囊进行定性分析和定量检测。具有高藻、高有机质和高絮凝剂含量的水源水样本应先进行前期处理。
2、采样:
碳酸钙沉淀法(适用于浑浊度大于或等于 20 NTU 的水样),即水源水,宜采集10L;样品采集后若不能立即处理,可于1℃~10℃冷藏保存,在72h内进行浓缩处理。
3、样品浓缩
①将水样转人10L平底桶,置于磁力搅拌器上,边搅拌边加人100mL氯化钙溶液,待混匀
后边搅拌边加人100ml碳酸氢钠溶液。
②用氢氧化钠溶液调节pH至10,静置12h~16h后使用软管通过虹吸效应吸去上清液,余下约200mL沉淀物。
③加人200mL的氨基磺酸溶液溶解余下的沉淀物,转移至500ml离心杯中,用少量PBST分次洗涤平底桶,将洗涤液均加入上述500mL离心杯中。在2000g、20℃条件下离心10min(勿用制动器,减速度为0),弃去上清液,留下沉淀物。
④向离心杯中加入约15mLPBST,摇匀后平均分配至4个15ml离心管中,再用15mlPBST分3次洗涤离心杯,均分别转移至上述15ml离心管中。在2000g、20℃条件下离心10min(勿用制动器,减速度为0),吸去上清液,保留沉淀物。向上述各15mL离心管的沉淀物中添加PBS至10mL,混匀,在2000g、20℃条件下离心10min(勿用制动器,减速度为0),吸去上清液,保留沉淀物。记录4个15m离心管中沉淀物的总体积为V。
⑤若沉淀物总体积V小于或等于2ml,向上述浓缩后的沉淀物中各加人25mL的PBST置于涡旋振荡器上振荡1min混匀。并且记录V1=V。
⑥若沉淀物总体积V大于2ml,向上述4个15ml离心管浓缩后的沉淀物中需各加人的PBST体积为1.25倍的V。置于涡旋振荡器上振荡1min混匀。将4个15mL离心管中的混合液分装至多个15ml离心管,保证每个离心管内样品体积不超过3ml。该样品用于后续分离纯化和染色镜检的离心管数量最好大于或等于4个,为实际用于后续分离纯化和染色镜检的液体体积的1/6。
水样大于10L时,根据水样体积重复步骤①-④,并根据15ml离心管中沉淀物的体积选择步骤⑤或者⑥进行沉淀物重悬。
