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滤膜浓缩/密度梯度分离荧光抗体法检测两虫之碳酸钙沉淀法

浏览: 5 次 发布时间:2025-03-26

1、原理:

首先在水样中加入氯化钙溶液和碳酸氢钠溶液形成碳酸钙沉淀浓缩样品,将浓缩后的样品通过密度梯度离心进行分离纯化然后将纯化后的样品经免疫荧光染色通过荧光显微镜对贾第鞭毛虫孢囊进行定性分析和定量检测。具有高藻、高有机质和高絮凝剂含量的水源水样本应先进行前期处理。

2采样:

碳酸钙沉淀(适用于浑浊度或等于 20 NTU 的水样),即水源水,宜采集10L;样品采集后若不能立即处理,可于1℃~10℃冷藏保存,在72h内进行浓缩处理。

3样品浓缩

将水样转人10L平底桶置于磁力搅拌器上边搅拌边加人100mL氯化钙溶液待混匀

后边搅拌边加人100ml碳酸氢钠溶液。

用氢氧化钠溶液调节pH10静置12h~16h后使用软管通过虹吸效应吸去上清液余下约200mL沉淀物。

加人200mL的氨基磺酸溶液溶解余下的沉淀物转移至500ml离心杯中用少量PBST分次洗涤平底桶将洗涤液均加入上述500mL离心杯中。在2000g20℃条件下离心10min(勿用制动器减速度为0)弃去上清液留下沉淀物。

向离心杯中加入约15mLPBST,摇匀后平均分配至415ml离心管中再用15mlPBST3次洗涤离心杯均分别转移至上述15ml离心管中。在2000g20℃条件下离心10min(勿用制动器减速度为0)吸去上清液保留沉淀物。向上述各15mL离心管的沉淀物中添加PBS10mL混匀2000g20℃条件下离心10min(勿用制动器减速度为0)吸去上清液保留沉淀物。记录415m离心管中沉淀物的总体积为V

若沉淀物总体积V小于或等于2ml向上述浓缩后的沉淀物中各加人25mLPBST置于涡旋振荡器上振荡1min混匀。并且记录V1=V

若沉淀物总体积V大于2ml向上述415ml离心管浓缩后的沉淀物中需各加人的PBST体积为1.25倍的V。置于涡旋振荡器上振荡1min混匀。将415mL离心管中的混合液分装至多个15ml离心管保证每个离心管内样品体积不超过3ml。该样品用于后续分离纯化和染色镜检的离心管数量最好大于或等于4为实际用于后续分离纯化和染色镜检的液体体积的1/6

水样大于10L时,根据水样体积重复步骤①-④,并根据15ml离心管中沉淀物的体积选择步骤⑤或者⑥进行沉淀物重悬。


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