1、倾注量：一般倾注量在18-20ml左右，如果培养时间超过48小时或者是培养温度高于40℃，为防止水分过量蒸发导致平板开裂，倾注量大约为25ml左右。若培养皿带有刻度，按照刻度倾注即可。

2、灭菌后保存：目前大多数实验室培养基灭菌后，会放置水浴锅或者烘箱中，需使用的时候拿出来直接倾注倒板。但培养基静置时间不宜过长，静置时间一般不超过4小时。静置时间过长，培养基中琼脂可能会少量凝固，形成类似絮状析出。

3、添加：部分培养基在使用时需要额外添加成分、这些添加成分在加入前应先放置到室温，避免冷的液体造成琼脂凝结或形成片状物。

4、培养基凝固：在实验过程中不可避免因特殊情况而导致未倒板培养基已凝固，凝固后培养基可重新加热溶解。一般来说沸水浴或者电磁炉加热，不能重新再灭一次菌。

5、温度：培养基倾注时的适宜温度为46℃左右，培养基置手心感觉不烫，但是置手背感觉烫时，培养基温度大约就是46℃。培养基倾注时温度太高的话，会影响实验结果的准确性且凝固时间较长，另外皿盖上会有大量冷凝水，不利于后续实验。温度太低则容易出现倒板过程中瓶中培养基部分凝固的现象。